核酸检测类产品

1.目前“牧康灵”检测相关产品有哪几大类？

答：目前我们有三大类检测产品：一是核酸类产品，包括荧光定量PCR检测配套产品；二是病毒抗原（蛋白）类检测产品，包括常见猪病的胶体金抗原快速检测卡；三是猪健康体检类产品，包括猪的寒度检测试剂盒、朊度检测试剂盒和活度检测试剂盒等。

2.牧康灵核酸检测类产品的优势?

答：核酸检测包括核酸提取和PCR反应两个步骤，所以包括两种试剂盒。

其中核酸提取试剂盒我们更专业，特别是针对非洲猪瘟病毒检测，养殖场对于临床唾液样本采集和环境监测的特殊要求，我们开发了高效准确的唾液样本核酸提取试剂盒和环境样本核酸提取试剂盒，通过实验对比验证，这两种提取盒的效率是普通试剂盒提取量的10倍以上。

其次是荧光定量PCR检测试剂盒，通过实验室对比检测，我们PCR试剂盒的灵敏度不仅检测血液样本灵敏度是100%，而且检测唾液和环境样本灵敏度也高达100%，对于猪场精准检测，精准清除具有更好的指导意义。

3.非瘟检测猪唾液样本为何要用唾液专用核酸提取盒，普通提取试剂盒不能提取吗？

答：中国动物疫病预防控制中心发布的第二批非洲猪瘟现场快速检测试剂名单，包括26个企业的34个产品。但是实验室测评和筛选产品时，检测样品类型仅限于猪血液和猪组织样品。但是猪场在非瘟形势下想存活下来，要靠早期监测生物安全防控效果，用的样本大多是猪的唾液和环境物质，非瘟病毒含量低，并且不同样本的核酸含量、酶含量、特殊杂质含量都不一样。所以说，目前不配套核酸提取试剂盒，仅含有核酸提取液的非洲猪瘟病毒荧光PCR快速检测试剂盒或提取效率低的核酸提取试剂盒并不能满足猪场的临床检测需求。

4.唾液样本有何特殊性？

答：首先，唾液样本中含有丰富的酶类物质：有溶菌酶、唾液淀粉酶、过氧化物酶、碱性磷酸酶、酸性磷酸酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、丙酮酸激酶、谷胱甘肽还原酶等，大量酶类物质会对病毒的核酸有一定的降解作用。其次，唾液样本病毒含量本身较低，提取效率不高的试剂盒直接影响检出率。

5.唾液样本核酸提取盒专门用于提取唾液，那血液或其他样本可以提取吗？

答：唾液样本核酸提取试剂盒适用于从唾液样本中提取基因组DNA。试剂盒采用独特的裂解液和缓冲液系统，配合高效吸附DNA的吸附膜，在一定条件下对唾液中含量不多的DNA具有极强的吸附富集能力，当条件改变时又可以可逆地释放DNA，从而达到快速分离纯化DNA、并最大限度地去除蛋白质等杂质的目的，从而保证提取核酸的纯度。

其他血液和拭子样本也可以用该试剂盒提取，但相对而言，该试剂盒更适用于唾液样本。

血液样本可用普通核酸提取试剂盒即可，其他简单的拭子样本也可用该试剂盒提取，但若是样本类型复杂、含杂质较多，建议用环境样本核酸提取试剂盒高效提取。

6、针对唾液样本中非洲猪瘟病毒的检测，怎样检测更灵敏？

答：首先唾液样本检测要用专门的唾液样本核酸提取试剂盒来提取病毒核酸，这样能更精确的抓住唾液样本中少量的病毒核酸，便于下一步扩增检测。其次，PCR检测要选用高度灵敏的反应试剂盒，普通检测血液样本的PCR试剂盒还不能满足唾液样本中低浓度核酸的检出。所以两种试剂盒是配套，是检出唾液样本中非洲猪瘟病毒的关键。

7.环境样本核酸提取试剂盒主要针对什么类型的样本？

答：环境样本核酸提取试剂盒是专为环境样本DNA提取而设计的，适合从各种环境如猪场土壤、底泥、漏缝地板以及各种动物粪便、尿液，猪舍内外地面、墙面，运输车辆各部位和人员头发、衣物等处采集样本，采用棉拭子蘸取足量此类样品，从中提取高产量、高纯度的核酸DNA。

8.环境样本核酸提取试剂盒效果与普通核酸提取步骤有何不同？

答：产品试剂组成除了有传统的裂解液、洗液和洗脱液，还针对环境样本的复杂性和特殊性，增加了干珠管、S2增强裂解液、S3-腐殖酸吸附剂和S4-结合液，其中干珠管可以更好的分散样本，让样本与裂解液充分接触和裂解，S3吸附剂可选择性吸附DNA样品中的腐殖酸等抑制因子，提高DNA纯度，检出效率更高。增加了试剂从而增加了处理步骤，但最终提取的核酸效率是普通提取盒的10-100倍。

9.唾液和环境样本核酸提取试剂盒的洗液在使用前都要加相应体积的无水乙醇吗？

答：是的。每个新提取盒第一次使用前，在两种洗液里面都要按说明书加入相应体积的无水乙醇才能使用。无水乙醇属于易燃易爆化学试剂，所以不能直接放在试剂盒里运输，需要使用单位自行购买准备。如果不能购买到实验室用的无水乙醇，可用医用的95%酒精代替，但注意不要购买还其他复方成分的95%酒精，一定是单一成分的酒精。

10.非洲猪瘟病毒检测有哪些检测产品可供选择？

答：目前非洲猪瘟检测有胶体金快速检测卡和荧光定量PCR检测试剂盒两种。

胶体金快速检测卡优点是操作简单，检测快速，缺点是准确度只有60-70%，且仅适用于发病猪的血液样本检测。

猪场早期监控和生物安全防控检测都需要用灵敏度高的荧光定量PCR检测试剂盒，样本最好是无创采集猪唾液样本进行检测。

除了PCR反应盒要选择高度灵敏的检测试剂盒，核酸提取步骤也要用唾液和环境样本专用核酸提取试剂盒。这样全面配套，才能保证检测结果的准确性，发挥猪场早期检测的精准监控作用。

11.PCR检测对基层猪场的实验环境条件有何要求？

答：基层猪场PCR实验室按照专业PCR检测实验室标准来建设成本太高，可通过划分区域，通风换气和消毒清洁等方法来保障实验室检测工作的正常运行。

建议猪场检测实验室至少分三个区域：一是样本处理区，用来做样本前处理和核酸提取；二是试剂配制区，用来配制和分装PCR反应液，添加核酸模板等；三是PCR 扩增区，用来上机检测，观测结果。各工作区要有一定的物理隔离，如隔板、房间、超净工作台等。各区的移液枪、吸头、离心管等实验用品要专区专用，不能交叉混用。实验人员进入不同区域操作时最好更换衣服和手套，防止交叉污染。

12. PCR实验室各区功能及主要设备有哪些？

答：样品制备区：主要进行样品的收集、保存和核酸提取，本区主要设备有冰箱，离心机，水浴锅、涡旋振荡器、移液枪等。试剂耗材包括核酸提取试剂盒、采样棉签、唾液采集包、5ml、1.5/2ml离心管、1.5ml离心管架、大中小号枪头、生理盐水、无水乙醇或者95%酒精、一次性手套、口罩等。

试剂配制区：主要进行PCR反应液的配制和加样，本区主要设备有冰箱、掌上离心机、移液枪等，主要试剂耗材包括PCR反应管、PCR荧光检测试剂盒、PCR管板架、75%酒精棉球等。

PCR扩增区：PCR仪上机检测。本区主要设备有电脑、荧光PCR检测仪等。

以上仪器、试剂和耗材可在本公司一站式配齐，无需额外购买。

13.PCR实验室常用的消毒剂是那种？

答：PCR实验过程要认真细心操作，避免动作幅度过大，引起核酸形成气溶胶污染实验室。每次实验完毕后用10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器，及时清理实验产生的生物垃圾，最好无害化处理或者在空旷地方烧毁。

14.PCR检测试剂盒需-20度保存，每次使用前融化，这样反复冻融会影响检测结果吗？

答：PCR检测试剂盒平时要保存在-20度冰箱，用前放在室温或4度冰箱融化。由于反应液中的酶和荧光物质等对温度敏感，建议反复使用的次数不能超过5次，最好3次左右用完。

15.通常提取试剂盒都在室温条件下保存，里面的蛋白酶K也放在室温可以吗？

答：蛋白酶K需按照试剂盒说明书要求保存在2-8度或者-20度，不能跟提取盒的其他试剂一起放在常温，这样会大大影响酶的活性。所以建议蛋白酶K应按照说明书要求在低温条件单独存放和运输。

三、猪健康体质检测类产品

1、牧康灵有个产品叫“寒度检测试剂盒”，请问怎么理解“寒度”的概念？

答：寒度，顾名思义，寒的严重程度。寒，其实是一种状态；度，堵也，界限也。从中医来讲，寒气被堵在身体内就是“寒”。

2、寒度检测试剂盒对临床有哪些指导意义？即“寒度”的现代科学含义。

第一、提示体内存在毒素蓄积程度：人或动物吃入了食物，经过消化、吸收以及其它系列代谢，代谢产物通过各种途径（比如呼吸、唾液、尿液、汗液、粪便等）排出体外。但是，总有一些代谢产物会在体内短期存留或长期滞留，这些停留的物质就成为蓄积的毒素。所以，“寒度”越高，机体毒素蓄积的程度（被堵的程度）就越严重。

第二、提示机体肝、肾功能受损程度：当机体内存在毒素蓄积的时候，肝脏的解毒功能和肾脏的排泄功能受到影响，肝、肾等器官的功能受损就顺理成章了。所以，“寒度”越高，肝、肾等功能受损越严重。

第三、提示免疫功能高低：当肝、肾功能受损失以后，体内毒素蓄积进一步加重，导致机体免疫功能持续下降，免疫抑制开始出现，病原体继发感染，生产上和临床上的问题越来越严重。所以，“寒度”越高，机体的免疫功能越低下，免疫抑制的程度越深。

3、如何解决“寒度”过高的问题？

答：以下几点非常重要：

（1）首先，必须减少寒性物质的过量摄取，如蛋白质、矿物质、霉菌毒素、抗生素、维生素B和维生素C，等等。

（2）其次，通过营养调控和中药产品进行保肝和护肾，促进毒素物质的代谢分解和排泄。

（3）第三，维持相对较高的环境温度。当猪群出现“返情”、“流产”、“呕吐”、“腹泻”、“泪癍”和“毛孔出血”时，表明机体在“排寒”；当猪群表现为“喜静不喜动”，互相挤压一起“抱团取暖”时，表明猪群的“寒度”过高。

4、寒度检测试剂使用时注意什么问题？

答：（1）注意唾液采集的时间，在清晨猪未采食之前，也就是控食一晚，检测结果比较准确；（2）猪发生炎症反应时，颜色会比较浅。

5.寒度和朊度检测试剂盒有哪两种检测形式？

答：有通过比色卡肉眼判断检测结果的“比色法”和通过唾液检测仪直接读取结果的“数值法”。两种方法检测原理相同，只是判读结果的方法不同。

6、寒度检测试剂盒（比色法）的检测方法和结果判断标准是什么？

答：先加2滴猪唾液，再加18滴寒度试剂盒配套的检测试剂于同一个比色杯孔，20分钟后，根据显色深浅判断检测结果，通过与试剂盒中的比色卡对比读取色度值：色度值≥1.0 时，机体寒度均处于非正常水平，且色度越高寒度越高；也就是只要有颜色出现，均提示机体为非正常水平。

7. 寒度检测试剂盒（数值法）的检测方法和结果判断标准是什么？

答：先加1滴猪唾液，再加9滴寒度试剂盒配套的检测试剂于同一个玻璃管中，20分钟后，将玻璃管放入唾液检测仪的检测孔中，开机，根据检测仪显示数值判断检测结果：仪器数值>0时，机体寒度处于非正常水平，且数值越高寒度越高，也就是只要有颜色出现，均提示机体为非正常水平。

8、寒度检测试剂盒（比色法）的包装规格是怎样的？有效期多久？如何保存？

答：寒度检测卡一盒9头份，有效期6个月，常温10-30度保存（注意：不可以放置冰箱冷藏或冷冻，否则容易让颜色衰减）。

9、你们的“朊度检测试剂盒”是用来检测什么指标，有何指导意义？

答：朊度是机体内在抵抗力的重要指标，即营养程度和蛋白水平高低。本试剂盒检测的猪唾液朊度值越高，代表它的营养状况越好，机体免疫抵抗力越好，反之则抵抗力较差。用于指导养殖生产中饲料营养的增减。

10.朊度检测试剂盒（比色法）的检测方法和结果判断标准是什么？

答：先加2滴猪唾液，再加18滴朊度试剂盒配套的检测试剂于同一个比色杯孔，20分钟后，根据显色深浅判断检测结果，通过与试剂盒中的比色卡对比读取色度值：色度值<5.0时，机体朊度处于非正常水平，而色度越高朊度越高，代表机体营养水平和抵抗力越好。

11. 朊度检测试剂盒（比色法）的包装规格是怎样的？有效期多久？如何保存？

答：朊度检测试剂盒9头份/盒，常温10-30度避光保存，有效期24个月。

12. 朊度检测试剂盒（数值法）的检测方法和结果判断标准是什么？

答：先加1滴猪唾液，再加9滴朊度试剂盒配套的检测试剂于同一个玻璃管中，20分钟后，将玻璃管放入唾液检测仪的检测孔中，开机，根据检测仪显示数值判断检测结果：仪器数值<50时，机体朊度处于非正常水平，而数值越高朊度越高，代表机体营养水平和抵抗力越好。

样本采集类产品

1.血液样本采集和检测有什么优缺点？

答：非洲猪瘟在我国爆发之前，猪场中最常用病原检测方法为血液或病料PCR检测，活体一般采集血液样本。它的优点是灵敏度高，结果准确，但缺点也非常突出：

（1）  采集血液属于有创检测。对于活体待检猪采集血液，会对猪造成很大的应激反应，哺乳期母猪容易造成无奶或者少奶的现场，妊娠期母猪会造成猪的流产；病猪容易加重病情，严重会直接导致死亡。

（2）  需要专业人员、专业仪器设备。

（3）  非瘟疫情下采血极易造成阳性病毒扩散，传播风险极高。

（4）  血液检测病毒阳性说明病毒已经从局部黏膜进入血液循环了，对于非洲猪瘟来说已经是临床发病期，会造成病毒扩散和传播，极其不利于早期监控和精准清除。

2.唾液样本采集有何优缺点？

答：唾液样本采集简单，对猪零应激，无病毒扩散风险，非常方便和适用于猪病检测项目的样本采集。

目前该采样方式在非洲猪瘟的早期监测和及时清除中发挥着极其重要的作用。唯一缺点是样本病毒含量不高，需配合灵敏准确的试剂盒使用。

3.牧康灵的唾液采集包的包装规格及组成有哪些？

答：唾液采集包30份/盒，盒子里包含唾液采集袋、含唾液保护液的唾液收集瓶和密封袋。

4.什么时候采集唾液检测最准确？

答：采集唾液的最佳时间是前晚停料不停水，控食过夜，第二天凌晨喂料前采集唾液。

5.唾液采集包如何使用？

答：将唾液采集袋悬挂在猪栏上，高度大致与猪头平齐；让猪只自由咀嚼采集袋，大约3分钟以上收集唾液；取下唾液采集袋，放入密封袋中；将密封袋唾液寄出至含有唾液保护液的收集瓶中待用。

6.唾液保护液有什么功能，与唾液样本混合后可保存多久？

答：唾液保护液的作用有三：

1） 保护唾液中病毒核酸不被降解，解决唾液中病毒半衰期短的问题。唾液中的病毒半衰期长短不一，长者 2～3 天，短者 1～2 小时不等。

2） 添加唾液保护液后，唾液可以短期冷藏、长期冷冻保存；

3） 提高非洲猪瘟病毒感染初期的检出率。

唾液采集后，挤出的唾液样本量与唾液保护液约1:1混合即可。短期内做检测，可以放置冰箱冷藏保存（15天内），如果要长期保存唾液样本，需要冷冻保存数月至数年。

7.如果猪生病严重、精神沉郁不愿咀嚼唾液采集包，怎么采集其唾液样本？

二是采样棉采样，这种方法适用于病猪口干，不愿咀嚼的情况，需人为将采样棉棒伸至猪口腔咀嚼，然后收集唾液，采样量略有减少，但也能满足检测需求。

抗原快速检测卡类产品问答

1.牧康灵抗原快速检测卡和PCR检测产品原理有什么区别？

答：（1）PCR方法是分子水平的诊断，检测的是病毒核酸，代表样本中该病毒的存在，可用于活猪和病死猪的实验室确诊检测。因为其高灵敏度，低含量的病原就可以被检测出来阳性。（2）牧康灵抗原快速检测卡是蛋白水平的诊断，是免疫层析原理，检测的是抗原，我们专利技术就是定位在临床上猪是否发病这个层面，根据这一定位而进行产品开发的。

2．牧康灵抗原快速检测卡跟市面上的抗体检测卡一样吗？

答：我们的检测卡是检测抗原的，不同于市面上做抗体检测的产品。而且我们的样本主要是采用唾液和粪便，市面上的抗体检测样本是血液。

3.你们抗原检测卡产品，现在能检测哪几种病？

答：公司目前有8款病毒性检测产品：蓝耳病毒抗原唾液现场诊断试剂盒、猪瘟病毒抗原唾液现场诊断试剂盒、圆环2病毒抗原唾液现场诊断试剂盒、伪狂犬病毒抗原唾液现场诊断试剂盒、口蹄疫病毒抗原唾液现场诊断试剂盒、流行性腹泻病毒抗原粪便现场诊断试剂盒、传染性胃肠炎病毒抗原粪便现场诊断试剂盒和轮状病毒抗原粪便现场诊断试剂盒。

4、你们抗原检测产品除了可以检测唾液，还能检什么样本？能检血液和组织病料和精液吗？

答：a.我们的样本，除了唾液，还可以检测粪便、水泡液和鼻腔液。如口蹄疫病毒感染，有水泡症状出现时，可以直接检测水泡液，以区分临床上有水泡症状的其它疾病；另外，传染性胃肠炎和流行性腹泻，可以直接检测粪便；根据临床症状怀疑蓝耳病时，如果猪只已经卧地不动取样方便时，可以检测鼻腔液，蓝耳病毒鼻腔液的病毒含量还要高于唾液。

b. 我们公司主要做无创检测产品，故血液不是我们产品检测的对象，不用来检测血液。我们未进行用血液样本检测的研究和对比数据，用牧康灵检测卡检测血液样本结果不可信。

c. 目前产品未做过精液相关对比研究，所以用牧康灵检测卡检测精液结果不可信。

5、你们的抗原检测产品能区分野毒和疫苗毒吗？

答：（1）在实验室层面是不能区分野毒和疫苗毒的；

（2）在临床上可以区分野毒和疫苗毒。接种疫苗后，机体发生免疫应答，产生抗体以中和疫苗毒，7-10天后疫苗毒基本不再向外排毒或者排毒量很低，此时若在唾液或者粪便中检测出来的阳性结果即可判断为野毒，而非疫苗毒！

6、牧康灵抗原检测卡使用还需要配合其它设备吗？

答：不需要。“无创简便、现场快速、正确诊断”是我们产品的最大特点和优势，只需要牧康灵检测试剂盒就可以了，不需要再额外使用其它工具。

7、牧康灵抗原检测卡准确率怎么样？有没有PCR准确？

答：单从灵敏度的角度来讲，PCR方法灵敏度较高，如果要做猪群的净化或者种猪入栏筛查，建议使用PCR检测方法；但是二者的临床功能定位不同，我们给猪场的结论是“正确”的方向，而不是“准确”的数值，如果要在临床上判断猪发病情况，建议使用牧康灵检测卡。临床发病猪样本在检测限基础上，准确率可达98%以上。

8、牧康灵抗原检测卡有何临床指导意义？

答：牧康灵抗原检测卡告诉给猪场是一个“正确”的方向：

有没有得某种病？②该不该用苗、用药？或采取保健措施？

有病就针对该种病进行紧急接种或者采取治疗保健措施，减少猪死亡或发病的经济损失；没该种病就不要针对该种病进行治疗，减少由于误诊造成的浪费。临床上其它方法，或许会告诉猪场一个“准确”的数值，但是“准确”不等于“正确”，因为临床上“病原存在”不等于“发病”，所以我们老百姓总是花了很多不该花的钱，现在一定要有正确的选择：不该花的钱不花，不该有的损失不要有！只有方向正确了，后面的选择才是正确的！而我们牧康灵检测产品就是解决老百姓这一类问题的，最终的目的就是提高猪场的经济效益。

9、牧康灵抗原检测卡有哪些优势？

答：（1）样本是无创样本：

牧康灵检测卡：用唾液或者粪便作为检测样本，属于“无创”样本；即在取样的过程中，不会对猪造成任何伤害，猪没有任何应激反应；

（2）操作简单易行：

牧康灵检测卡：属于猪场现场诊断方法，不需要专业人员，不需要配备专业仪器设备，人人都可以操作，操作非常简单；

（3）出结果的时间非常快：牧康灵方法出结果时间：现场10-30分钟，从操作取样开始至出结果时间非常快。

28、抗原诊断卡使用有效期是多少？需要放在冰箱里面保存吗？

答：有效期两年。常温干燥处放置即可，不需要放在冰箱保存。

10、检测唾液样本的抗原诊断卡可以随时在猪场检测猪唾液吗？

答：使用时要注意检测时间，在猪进食后至少半小时后进行，主要是为了避免食物残渣阻塞采集头，从而影响上样。

11、在使用过程中，牧康灵各种抗原诊断试剂盒配的展开剂能通用吗？

答：不能通用。每种卡配套的展开剂都不相同，展开剂瓶上都有标注产品的英文缩写名称，在使用的过程中务必配套使用。

12、牧康灵抗原检测卡一个可以测几头猪？几个病？

答：我们的检测卡一支只能检测一头猪、一种病原。本产品是一次性使用产品，不可以重复使用。

13、抗原检测卡拆开后，当时没有使用，过几天还可以继续使用吗？

答：不可以。因为检测卡吸湿性比较强，要在拆开后的一个小时内尽快使用，否则极易吸收空气中的水分，而导致检测结果不准确。

14、牧康灵抗原检测卡颜色深浅，能说明病毒含量高低吗？弱弱的两个条带出现算阳性还是阴性？

答：我们的抗原检测卡，是定性检测产品，不是定量，所以颜色深浅与病毒含量高低无直接对应关系。只要有肉眼可见的两条条带显色，无论颜色深浅，都可判定为阳性，即猪场发病原因或者猪场不稳定因素提示。

15、牧康灵抗原检测卡的展开剂一瓶没用完，一个月后还可以再用吗？

答：可以的，我们配装展开剂的滴瓶有两个盖子，我们使用时请打开上面的小盖子，而不是大盖子，使用后盖好小盖子，放置阴凉干燥处不被污染即可！

16、蓝耳病唾液抗原检测卡可以区分蓝耳的毒株吗？

答：不可以。我们的检测卡是蛋白水平的检测，不是分子水平的检测，所以不能精准判断是哪个毒株，但是我们的蓝耳检测卡对经典株和高致病性毒株都有效。

17、牧康灵口蹄疫病毒唾液抗原检测卡是针对哪种型的？

答：我们的口蹄疫抗原检测卡针对口蹄疫O型和A型有两种产品，可以用来区分不同型的口蹄疫感染。

18、病毒性腹泻不需要检测，一看就知道，检测的意义在哪？

答：病毒性腹泻有几种情况：流行性腹泻、传染性胃肠炎和轮状病毒，都有相似的症状，根据临床症状，很难确诊是哪种病因引起，所以辅助诊断尤为必要。

19、猪瘟在唾液中的检出率高吗？

答：猪瘟在全国的病原检出率不高，因为疫苗的有效保护，猪瘟苗在国内做的还是非常好的。

20、临床检测时，有好的检测方案建议吗？

答：在检测前，先根据临床发病症状预判筛查待检病原种类，再进行检测卡的诊断。

21、抗原检测卡的检测抽检比例大概是多少？

答： 5头猪-10%不等。有兽医临床经验的，可以根据临床表现初步判断锁定待检猪，一般一个单元检测5头猪即可代表群体发病情况；对于兽医临床经验不足的，可以扩大检测范围，从5头猪-10%比例不等。

22、按指导方案检出一种病原阳性后，下面还需要再检测其它病原吗？

答：要根据临床实际发病情况来确定是否还需继续做其它病原的检测。

23、病猪用牧康灵8种抗原检测卡检完了，没发现阳性，该怎么办？

答：（1）发病猪本身的发病原因就不在我们7种病原检测的范围内；（2）如果挑选的待检猪有临床症状，而结果阴性，首先考虑操作是否准确；如果操作都正常，还要根据猪的实际发病情况综合判断，如果猪的发病已经接近尾声，自身已经耐过病毒，检测出阴性也是正常结果；（3）若不放心检测结果，隔天可以重新测试。

24、检完唾液样本还要检血液吗?

答：可以根据客户自己的需求，如果对检测结果持怀疑态度，可以用PCR血检方式重新检测进行验证，但是前提是检测卡出现阳性结果时，复核看是否为假阳，如果是阴性结果，复核也没有意义。因为如果猪群“稳定”，我们的检测卡本身就是阴性。

25、牧康灵抗原检测卡在使用时有哪些注意问题？

答：（1）对于唾液检测卡，要在采食后至少半小时采取唾液样本，以防食物残渣阻塞采集头；

（2）对于粪便检测卡，要采取新鲜粪便样本，在肛周刮取或者猪栏地面采集；

（3）产品均为一次性使用产品，一个卡只检测一个病原，不能重复使用；

（4）产品开封后，要在一小时内使用，过后使用会导致检测结果不可信；

（5）产品常温保存即可，注意夏季车内后备箱温度过高，不要长时间放置在车后备箱中。

26、牧康灵抗原检测卡结果如何判断？

答：检测结果非常容易判断，显而易见：

（1）T线处与C线处各出现一条显色条带，不论T线处条带颜色深浅，均提示阳性；

（2）仅C线处出现一条显色条带，提示为阴性；

（3）C线处未出现显色条带，检测结果无效。

27、牧康灵抗原检测卡C线不出现，一般是什么原因？

答：（1）在进食30分钟内采集唾液，导致食物残渣阻塞采集头，不能正常上样；

（2）唾液粘稠度较高，阻塞采集头，不能正常上样；

（3）唾液样本较脏，里面含有大量污染物或其它杂质，导致不能正常上样；

（4）产品破损或超过保质期，致使产品失效；

（5）卡本身质量问题（概率低于0.01%）。

28、牧康灵抗原检测卡如果不上样，有什么好的解决方案吗？

答：（1）对于唾液检测卡，可以增加展开剂用量，将展开剂重新滴加到采集好的唾液样本中4-6滴。

（2）对于粪便检测卡，插入到展开剂瓶中3分钟后仍不上样，可以取出检测卡平放，至出现上样再放入展开剂瓶中即可。

29、牧康灵抗原检测试剂盒一盒多少支？

答：产品分唾液和粪便检测卡两类，唾液的2头份/小盒，12头份/中盒，所以唾液检测卡一中盒24头份；粪便检测卡没有最小包装，30头份/盒（1头份即一支）。

30、牧康灵抗原检测卡试剂盒一件多少支？

答：唾液和粪便检测卡都是16（中）盒/件，所以，唾液检测卡是384头份/件；粪便检测卡是480头份/件。

31、牧康灵抗原检测试剂盒保质期多长？

答：不同抗原产品有效期有所不同，使用有效期为1-2年。

32、产品可以退换吗？

答：如果属于产品质量问题可以退换，如果是因为客户自身原因导致滞销，则不予退换。

33、产品打开内包装多久还能使用？

答：打开后，在一小时内尽快使用。

34、牧康灵抗原检测卡没有出现 C线可以退换吗？

答：没有出现C线的原因有很多，如果属于产品质量问题，可以在购买处进行退换。

35、牧康灵抗原检测卡可以检测细菌吗?

答：目前的8款产品都是针对病毒性疾病开发，还不能检测细菌，后期会陆续推出。

36、牧康灵抗原检测卡有时候 10分钟就红线,有时候 1个小时都没红线怎么办?

答：出现红色条带时间的早晚，跟样本的稀稠程度有关，样本越稀薄清亮，显色越快。如果半小时还没有出结果，就要重新进行检测了，可以通过多滴加展开剂的方法避免由于样本过于粘稠而导致的上样不畅。另外还要注意，检测时间要在猪进食后半小时进行，以避免食物残渣阻塞采集头而导致上样不正常。

37、牧康灵抗原检测卡怎么采集唾液检测?

答：如果是抗原检测卡采集方法都相同，将采集头前端放置口中，让猪自由咀嚼，直至采集头湿润为标准。如果是唾液采集包，可以将唾液采集袋吊在猪栏上，高度大概与猪头平齐，让猪自由咀嚼；或者用止血钳夹住唾液采集袋，放置猪口中咀嚼，至唾液量足够。

38、病情严重的猪不咬采集头或者采集包怎么办？

答：我们可以主动将检测卡的采集头放入猪口中刮取唾液。

39、有样品给我试用吗？

答：没有免费试用样品，可以折扣优惠价格提供试用产品。

40、抗原检测卡用唾液检的有血检的准吗？

答：是的，唾液的组分与血液具有同源性，能够对机体状况变化做出及时反映，唾液中不但储存了大量口腔以及身体其它部位感染微生物和病毒的信息，其本身也是蓝耳、伪狂犬、猪瘟、猪圆环等多种疫病的主要排毒途径之一。完全可以代替血液作为样本进行临床病原检测，或抗体检测，也就是能用血液进行检测的，完全可以用唾液进行检测。

41、病猪临床症状很明显，还有必要检吗？

答：有必要，因为现在临床上发病，病症虽然明显，但是并没有某种疾病的典型症状，很多病症非常相似，所以仅通过临床症状，很难确诊到底是什么病原引起猪群发病，因此还是非常有必要用牧康灵检测卡进行辅助诊断。

42、公司如何保证产品的质量稳定？

答：产品质量无疑是企业的生命线，所以公司必然会注重产品的质量及稳定性，我们有自己的研发、生产和质控中心，从产品的研发、生产到包装的整个过程都有自己的内控标准和质量控制，可以保证给到客户手里的产品都是质量稳定的产品。

43、能否有技术专家帮助开发规模猪场用户？

答：有。我们可以提供技术支持。

44、牧康灵系列产品检测为阳性，有好的治疗保健方案吗？

答：我们会有建议方案，但是具体的治疗保健方案要由当地技术人员或者兽医根据临床症状做最终判断，我们公司的产品主要以做检测为主，是临床很好的辅助诊断工具。

45、确定经销合作后，贵公司有人帮我跟进吗？

答：有。如果是技术问题，都可以咨询公司技术服务老师；如果是业务上的问题，我们也会有专业招商人员进行跟踪服务。

46、公司能否作会议营销？

答：可以，只要市场资源满足，完全可以做会议营销。

47、以一个经产母猪一万头的县城为例，牧康灵系列产品有多大的市场容量？

答：市场容量可以从三个方面来计算：

（1）临床疑似病例，数量不确定；

（2）日常监测：a/ 母猪10000头，按10%比例，一年检测4次，按平均检测3种病原计算，一年即是：1000*4*3=12000头份

b/ 存栏按10万头计算：检测比例按1%计算，一年检4次，按平均检测三种病原计算，一年即是：1000*4*3=12000头份

合计检测：24000头份

市场容量估算：60*24000元=144万元

48、你们检测到的窗口期是怎么设定？

答：窗口期一般是用于检测抗体设定的，即注射疫苗之后，机体产生抗体的这段时间，我们的产品是检测抗原的，所以对于我们的产品不涉及窗口期的设定。

49、你们的抗原检测试剂盒适合做监测吗？

答：适合，根据猪场实际情况做监测方案。

50、产房乳仔猪能做检测吗？

答：无论哪个阶段的猪，都可以做检测。

51、结果判读时间一定要20分钟吗？

答：不一定，结果判读的时间跟临床样本的稀稠度有很大关系，有的样本清亮稀薄，最快10分钟就可以出结果；有的样本比较粘稠，出结果就会慢一些，但是一般半个小时左右都可以进行结果判读，最长一小时内的结果在可信范围内，超过一小时的判读结果不准确。

52、你能到猪场亲自教一下整个检测流程吗？

答：不需要到猪场，我们有拍摄好的视频，都是在猪场实际场景完成，根据视频可以很好的学习，看了视频您就会发现，实际操作非常简单，很容易学会。

53、唾液中的病毒量有血液高吗？

答：不能一概而论，每种病毒在血液和唾液中的排毒量都不同，有的唾液中病毒的含量就会高于血液很多倍，比如圆环2病毒，病毒含量是血液的3倍还多。

54、什么是抗原？

答：凡是能够刺激机体产生抗体和效应性淋巴细胞并能与之结合，引起特异性免疫反应的物质，称为抗原。

55、病原检测的意义？

答：通过病原检测，可以直接判断猪群带毒情况。其中，牧康灵诊断卡直接检测抗原，可以直接判断猪发病病因或者造成猪群不稳定的因素。

56、什么是抗体?

答：动物机体受到抗原物质刺激后，由B淋巴细胞转化为浆细胞产生的，能与相应抗原发生特异性结合反应的免疫球蛋白，这类免疫球蛋白称为抗体（Ab）。

57、抗体检测的意义？

答：抗体检测，主要是看猪群在接种疫苗后的抗体水平如何，即可以直接判断猪群整体的免疫应答能力，主要通过猪群整体的离散度高低来进行判断；抗体检测还可以间接判断猪群是否有野毒感染。

58、病毒的传播途径有什么？

答：病毒由传染源排出后，经一定的方式再侵入其它易感动物所经历的路径称为传播途径。根据传播途径的性质或病原体所经历的先后路径，可将其分为两类或两个阶段。一类即第一个阶段是病原体从传染源排出后到刚一接触被感染动物的这段路径，主要包括外界自然环境中的各种媒介，如空气、水源、土壤、饲料、医疗制剂、精液、卵胚、用具（包括医疗器械）、运输工具、节肢动物、野生动物（包括鸟类）、非本种动物和人类等；另一类即第二阶段是病原体从接触被感染动物到侵入动物体内器官组织的这段路径，主要包括呼吸道、消化道、泌尿生殖道、皮肤粘膜创伤（包括自然创伤和医疗性创伤等）和眼结膜等。

59、病毒在机体内的发展过程是怎样的？

答：简单地说，病毒进入细胞，DNA转录合成RNA、RNA翻译合成蛋白质外壳或RNA直接翻译成蛋白质外壳，病毒数量增加，宿主细胞裂解，病毒释放。

病毒自我复制过程：（1） 病毒体附着到宿主细胞表面并通过胞吞进入细胞；（2） 衣壳分解后，病毒核糖核蛋白转运入核；（3） 病毒基因组转录； 病毒基因组复制；（4）新合成的病毒mRNA出核并完成翻译；（5） 合成的核蛋白入核与新复制的核酸结合；合成的病毒表面蛋白进入高尔基体完成翻译后修饰并转运上膜；（6） 新形成的核衣壳进入细胞质并与插有病毒表面蛋白的细胞膜结合；（7） 新生成的病毒体通过出泡方式离开宿主细胞。

60、什么是传染源？

答：传染源，亦称传染来源，是指有某种病原体在其中寄居、生长、繁殖，并能排出体外的活的动物机体。具体说传染源就是受感染的动物，包括患病动物和带菌（毒）动物。

61、什么是无创检测，有什么取样方式？

答：顾名思义，“无创”检测，即取样时不会对机体造成创伤或创口，让机体不会产生任何应激反应，此方法可以很好的提高动物福利！

无创检测样本可以取唾液、粪便、鼻腔液、尿液、精液、乳汁等外周体液。

62、什么是有创检测，有什么取样方式？

答：有创检测，即取样时会对机体造成一定程度的损伤或伤害，如取血液、组织病料等，均需借助外界医疗器械植入机体内。

63、无创检测和有创检测各有什么优势和缺点？

答：无创检测优势和特点：取样操作简便，省时省力省人工，而且不会对机体造成很大的应激反应。无创检测将是发展的必然趋势。

有创检测，如血液检测的优势和特点：应用比较广泛，检测范围比较宽泛。

在样本检测工作中，为了迎合用户降低检测成本的需求，很多试剂公司推荐一种方案称为“混检”：即将两个或以上的样本混合检测，一旦出现阳性结果，则再次分检，找出阳性样本。这种检测方法，对于检测靶标数量较高的样本成功率较高，但对于靶标数量较低的样本漏检率高，且危害极大。

下面以非洲猪瘟的定点清除（拔牙）中广泛使用的“混检”方法做简单分析。

假定商品试剂盒的检测敏感性极高，在临床上将5份样本混合检测，出现阴性结果，则可以假定上述5份样本均为阴性。

若一旦出现阳性结果，则需进行分检，会出现至少1份，最多5份为阳性的结果。在这种情况下，对阳性结果的猪或猪群进行定点清理（单元格清理）。这是最为理想的状态。

但是，如果出现取样不均匀；或者样本没有进行充分保护，分检时出现靶标物降解以及提取试剂盒和扩增试剂盒的敏感性不高等因素，则有可能出现“混检”时阳性，分检时阴性的结果。这样的情况较多见且大大困扰技术人员，生产管理者也无从取舍，难以决断。

生产实际中最为可怕的情况是第四种，即“混检”阴性，若分检则出现阳性（实际上并没有人这么去做）。因为在实际检测工作中，一旦出现“混检”阴性的结果，则皆大欢喜，不再跟踪。这样的假阴性结果危害极大，会导致定点清除工作的失败。

综上所述，在非洲猪瘟的定点清除工作中，不推荐“混检”方案的实施，尽量避免样本之间的相互干扰，对种猪群实施单检（即逐头检测）策略。

（文 樊福好）

可能有认真关注疫情的朋友，会关注到近期新冠肺炎诊断中经常出现“假阴性”的情况；而中国工程院王辰院士在回答白岩松的提问时明确表示：“核酸对于已确诊的病人阳性率也只在30%-50%之间”。这让许多养殖户也联想到了我们非瘟病毒检测经常出现的假阴性，导致许多猪场复养失败。

那是什么原因导致假阴性呢？其实，一般的检测试剂盒用的应该是pcr扩增原理，就是把原来的rna病毒逆转录成dna链以后，再循环扩增，最后检测。

循环扩增的循环数应该是按标准操作流程固定的，初始的底物非常少的时候，循环扩增以后的dna可能就达不到检测阈值，就会可能造成假阴性。

借鉴我们养殖行业的非瘟检测，也解释了为什么我们许多猪场非瘟检测正常，复养后又“挨”非瘟的一个重要原因。

因此，检测非瘟，不但要求操作人员技术娴熟，操作规范，还要求检测装备能很好地获得和保护提取的环境样本。

非洲猪瘟肆虐中国一年多，时至今日依然难以净化。养殖户不敢复养，无非是安全复产的问题没解决。除了生物安全本身，非瘟检测也是摆在猪场老板面前最开始的难题。简单说就是：1、复产前如何检测猪场是否有非瘟病毒，2、复养后如何监控自己猪场日常疫情情况。

那具体如何保证检测的准确度呢？广东爱苏生物科技有限公司市场总监刘芮祎给出了自己的建议：

一、 样本采集后，要立即加入到“样本保护液”中，“样本保护”主要是防止样本在采集、运输和保存、待检过程中发生质量改变，避免检测“标的”的损耗甚至消失，如样本的腐败、病原体的减少、核酸的降解、抗体的衰减等等。在非洲猪瘟的检测过程中，这一问题就非常明显，给行业带来很多困扰。样本经过保护以后，就避免了此类问题的发生。“样本保护”应该成为行业检测的习惯！

二、 目前市面上市的多数核酸提取试剂盒都是针对血液和组织样去开发，而对于像唾液或者环境这种病毒量较低的样本核酸提取，就显得力不从心。因为血液、唾液、环境样本中的干扰物质不同，用通用的核酸提取试剂盒来提取唾液或者环境这种低病毒量的样本就不太科学。应该根据不同的样本，用专业的提取试剂盒效果更准确。

三、 通过培训，提高检测人员的专业能力，正确判读检测结果。

复养成功率普遍低于50%，7成猪场在较高风险区。

去年新牧网调研了全国各地249家猪场的风险指数，数据表明，接近17.5%的猪场处于橙色预警高风险等级，还有51.4%的猪场处于黄色预警较高风险等级，只有31%的猪场非瘟风险等级较低。

那么，当前复产成功率如何呢？2020年1月下旬，《农财宝典》新牧网记者通过采访各地金牌经销商，以母猪存栏（含三元母猪等）为代表，反馈各地复产情况。数据表明，养户在掌握相对有效的防控方案后，复养积极性均有所提高，行动也快，当地母猪存栏回升也快。四川、重庆规模猪场的母猪存栏恢复至80%，以及贵州的母猪存栏恢复至65%均说明集团养猪公司对产能恢复起着大作用。但值得注意的是，各地中小散户多在观望，大集团复养行动迅速。

环境中的污染载毒量成为未来猪场复产的关键风险因素。这也是为什么许多猪场复产前要做检测、复产后定时监测的重要原因。集团猪场在非瘟检测等生物安全上有较规范的操作体系，且规模效应使得其上量也快；贵州等地也得利于地理优势 ，环境病毒载量较低，复养成功率也较高。这是值得复养猪场学习的经验。

如今猪价依旧高企，非瘟疫情虽然趋于常态化，但防控形势依旧严峻，做好生物安全仍是当前唯一有效手段。广东爱苏生物科技有限公司总经理贺南航表示，当前猪价较为理想，若猪场非瘟检测防控得当，并成功出栏，基本可以不用考虑检测产品投入产出比的问题，关键是如何保证试剂盒更准确。而准确与否，不但是指检测设备本身，还包括了对标本采集后配套的保护力度、送检的速度。新冠肺炎诊疗方案第六版专门说明的“标本采集后尽快送检”，也正是这个道理，这是值得我们复养的猪场老板借鉴的宝贵经验与教训。

新冠肺炎出现假阴性，有人可能会质疑是不是因为核酸检测方法本身不行？比如在准确度上本身就比其它的差？